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欧宝和华体会:中国间充质干细胞药物开发的基本流程

发布时间:2022-05-31 01:43:30 来源:欧宝体育官网首页 作者:ob欧宝娱乐app网址

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  在全球范围内,干细胞药物的开发和上市一直备受关注,经常成为媒体和大众眼中的宠儿和热点。

  韩忠朝教授团队发表在STEM CELLS Transl Med.的一篇文章,为我们阐述了间充质干细胞药物开发的全过程,这有助于我们对间充质干细胞药物开发流程认识更清晰。理解更深刻。

  间充质干/基质细胞 (Mesenchymal Stem/Stromal Cells,MSCs) 具有自我更新、高度可塑性、分化能力、免疫应答和免疫调节等诸多优点,在再生医学领域具有广阔的应用前景。人们对 MSCs 的临床应用转化的兴趣从未像现在这样高涨。从临床级 MSCs 产品的开发到新药临床试验 (IND) ,许多生物公司都投入了巨大的努力。国家药品监督管理局 (NMPA) 已经实施了关于 MSCs 产品临床应用的规定。

  近年来,中国对MSCs产品作为药物管理的规定进行了更新。本文重点关注 MSCs 产 品开发过程中的流程和面临的监管挑战,目标是为满足监管需求而提供策略。本文为科学家、生物技术公司和临床试验研究人员介绍了一条开发 MSCs 治疗产品的成功途径。

  本文重点介绍了中国异体间充质干细胞药物开发的全过程,包括法规、指南、工艺、质量管理、IND 前会议和 IND 申请以便获得临床试验许可。本文将对有兴趣开发 MSCs 产品和其他细胞治疗产品的研究人员有较高的参考价值。

  MSCs 来源广泛,骨髓、脂肪、牙髓、脐带、胎盘、羊膜、子宫内膜组织、脐带血、外周血和角膜缘等人类组织都存在 MSCs 。 回顾过去二十年,因为 MSCs 在抗炎、促血管生成、免疫调节以及在特定条件下的多系分化能力方面的作用,MSCs 已成为最有希望用于临床治疗的候选细胞之一。MSCs 具有免疫豁免属性,给药前无需HLA配型。从少量的起始生物材料开始,规模化扩增相对容易。体内研究已经很好地证明了 MSCs 的效力、有效性和稳定性,以支持潜在的临床应用。

  全世界有超过 800 项注册的 MSCs 药品临床研究和超过 55000 份 MSCs 相关的文献。目前,人们越来越需要了解 MSCs 作为药品开发相关的法规问题。 大多数 MSCs 产品,符合2006年国际细胞治疗协会 (ISCT) 定义的 MSCs 的最小标准,包括细胞表面标记物 (即CD105, CD73,CD90) 的高表达, 与造血细胞相关的标记物 (如CD45、CD34、CD14、CD19和HLA-DR) 的低表达,以及三系分化潜能。细胞标记物在描述给定适应症的 MSCs 细胞产物时缺乏特异性。尽管,世界上大多数监管机构并不要求将纯化的 MSCs 作为临床产品,但在MSCs 产品开发过程中考虑细胞标记物时,需要确定一致性和纯度。

  在美国,根据《公共卫生服务法》 (PHS Act; 42 U.S.C. 262) 第351条的规定,经过培养扩增的 MSCs 产品需要向 FDA 提交 IND 申请,获得许可开展临床试验。 在欧盟,基于 MSCs 的治疗产品开发和授权由欧洲药品管理局 (EMA) 监管。EMA成立了高级治疗委员会 (CAT) ,负责 MSCs 治疗产品的审评和许可。 在中国,根据现行监管法规,在临床研究中使用 MSCs 可通过两种途径获得许可。其一,卫健委已经实施了细胞治疗产品开展临床研究的相关法规,批准通过伦理委员会审查合格的指定医院,进行 MSCs 临床研究。其二,如果申办者打算开发 MSCs 药物,则使用 MSCs 产品的临床试验需要根据 NMPA 法规获得CDE规定的 IND 申请并获得许可。IND 申请必须由申请人提交,并提供全面的信息 (包括细胞和制造工艺的开发、质量标准、质量控制、MSCs产品的稳定性研究、药效研究、安全性和毒性研究以及临床试验计划和试验方案) 。根据 IND 申报的规定,MSCs 产品必须在符合 GMP 实验室生产。

  本文,有助于 MSCs 产品开发者熟悉获得 IND 申请许可的流程和监管问题。

  1 基础研究包括:MSCs的分离、纯化、细胞特性分析、细胞培养基的开发、扩增和拟定适应症的作用机制(MOA)。

  3 药理学研究主要包括:确定目标适应症,巩固预期的作用机制,确定给药途径,确定生物活性剂量,确定疗效,证明安全性和药代动力学,等等。

  4 毒理学研究应考虑:单剂量毒性试验、重复给药毒性试验、致瘤性研究、遗传毒性试验、生殖毒性试验、抗原性试验、免疫毒性试验和局部耐受性等。

  工艺开发、配方选择、工艺验证、分析方法开发和验证、产品放行和稳定性特点、非临床研究、新药临床试验(IND)申请、I期临床研究、II期临床研究、III期临床研究、新药上市申请(NDA)和商业化。

  在美国,MSCs 和其他细胞药物属于FDA生物制品评估和研究中心 (CBER) ,特别是细胞组织和基因治疗办公室 ( OCTGT) 的监管,该办公室依据 CFR 标题 21 第 1271 部分对人类细胞、组织、细胞和基于组织的产品进行监管。

  在欧盟,MSCs 和其他细胞药物属于先进疗法药品 (ATMP) 的职权范围,包括体细胞治疗药物、基因治疗药物和组织工程产品。

  在日本,自 2014 年以来,人类细胞、基因或组织来源的医疗药品一直受到《药品和医疗器械法案》 (PMD法案) 的监管。

  在中国,最早以《中华人民共和国药品管理法》为指导,1984年全国人民代表大会首次颁布,2019年进行修订。随后,国家药品监督管理局 (NMPA) 根据本法成立。NMPA 负责制定药品质量标准、药品管理法规、安全监督和管理。NMPA 建立了药物评估中心 (CDE) ,用于药物审查和评估。中国所有的细胞治疗( 包括干细胞产品、免疫细胞产品和基因修饰细胞产品),均可参考NMPA在2017年出台的《细胞治疗产品研究与评价技术指导原则(试行)》规范。

  2020年4月26日,NMPA 更新了《药品生产质量管理规范(GMP)》的生物制品附录。NMPA 还起草了《药品生产质量管理规范(GMP)》(征求意见稿)中的细胞治疗产品附录。2020年8月4日,NMPA 还起草了《人源性干细胞及其衍生细胞治疗产品临床试验技术指导原则(征求意见稿)》。新药开发,也必须遵循现行《中国药典》和其他国家药品标准。此外,2017年,NMPA 加入国际人用药品注册技术协调会 (ICH) ,为新的成员,ICH 发布的所有指南都将得到 NMPA 的批准。

  因此,药物研发企业可以参考 ICH 的指南。有关细胞治疗的更多可参考美国FDA,欧盟 EMA ,美国注射剂协会 (PDA) ,美国的人体细胞组织优良操作规范 (GTP) ,以及国际制药工程学会 (ISPE) 的相关法规和指导文件。

  GMP 是一个质量保证体系,用于确保 MSCs 产品的持续生产和控制在适合临床使用的最先进的质量标准。因此,临床级 MSCs 应遵循 GMP 指南,按照 IND 法规和质量要求生产药品。GMP 原则是为了给消费者和患者提供一致质量和高安全水平的产品。为了满足这些原则,制造商必须建立、实施和维护药品质量体系。药品质量体系应监督所有活动 (从原材料进厂的控制、生产、测试、人员、设备、标识、生产记录审查、错误检测和纠正,以及产品最终放行的授权) 。确定并实施适当的产品质量改进、工艺改进、可变性降低、创新和药品质量体系改进,并提高持续满足药品质量的管理能力,质量风险管理有助于确定和优先考虑需要持续改进的方向。

  MSCs 产品的制造依赖于训练有素且符合岗位要求的员工,这是GMP 质量体系的重要组成部分。中国 GMP 的期望是涉及生产和管理各个方面的员工将接受系统的教育、持续的培训和定期考核,并且负责人应具有具体职责和充分的授权以履行他们的职责。此外,《药品生产质量管理规范(GMP)》的附录《细胞治疗产品(征求意见稿)》对包括产品生产负责人、质量负责人和质量受权人在内的关键员工提出了更高、更详细的资格要求。

  MSCs 产品生产环境和设施的空气清洁度水平应与产品和生产操作相适应,生产环境和设施不得对原材料、中间体和成品造成污染。MSCs 产品的生产环境和设施应易于、有效的清洁和消毒。此外,MSCs 产品的生产环境和设施必须持续监测。MSCs 产品的生产环境和设施的清洁、消毒、维护和监测操作必须进行定期验证和持续受制。生产设备的设计、定位和维护应符合其预期的目的和用途。生产、测量、称重、记录和控制设备应通过适当的方法和合格的机构在规定的时间间隔内进行维护、校准和检查。

  CDE 主要通过申请人的文件系统获得 GMP 合规性。这必须涉及操作和质量管理的所有方面,以便能够对一系列与产品制造和质量控制相关的所有活动执行审核。此外,《药品 GMP》(2010年修订)第8章指出,文件是质量保证体系的基本要素,生产商必须有书面的管理程序、质量标准、技术指南、制剂处方和工艺规程、标准操作程序和内容正确的记录。企业应建立管理和操作程序的文件管理程序,系统设计、编制、审核、批准和发布文件。质量管理部门应对与本规范相关的文件进行审核。文件内容应与药品生产许可证和药品注册的相关要求一致,并有助于追溯每批产品的历史记录。

  物料是指用于制造 MSCs 产品的原料或材料 (包括细胞、平衡盐溶液、蛋白酶、血清、培养基、细胞因子、各种添加剂、冷冻保存试剂、转基因材料、辅料、培养瓶、细胞冷冻保存袋等) 。生产物料与 MSCs 产品的质量直接相关,因此,物料管理必须基于良好和标准化的质量保证和评估体系 (包括风险评估、关键材料制造商和供应商的资格审核、质量放行测试的开发和改进等) 。物料的来源、成份、使用、用量和质量控制应清晰合理。在选择材料时,应考虑必要性、合理性和安全性,并开展工艺去除效果验证和安全风险评估,必要时应对材料残留进行测试放行。优先使用已被批准用于人类或符合药典标准的材料是非常重要的。对于生物来源材料 (如FBS和人白蛋白) ,应进行全面的外源因子检查,并在技术开发中考虑新外源因子的知识。使用自体细胞治疗产品应严格防止外源因子扩散的可能风险,材料管理的信息应在 IND 应用程序的 CMC 部分提供,CDE 评审员将确定制造的适用性。

  用于分离和培养 MSCs 的生物材料均来自供者,并需要签署了医院医学研究伦理委员会批准的知情同意书。每个供者都要进行人源病原体的筛查和检测,尤其是 HIV、HBV 和 HCV 的检测,所有用于培养扩增所需的起始材料和试剂都需要进行检测,以便证明材料是无菌和无内毒素的。

  细胞分离和培养扩增过程应在 GMP 条件下开展,并经验证以建立主细胞库 (MCB) 。质量控制需要同时实施,确保存储在主细胞库的细胞已经进行了无菌、支原体和内毒素检查和监测。因此,还要制定明确的规范和要求 (如细胞表面标记物、优化培养条件、细胞传代数、生长特性等) 。原则上,对于从适合建立主细胞库的生物材料中分离原代细胞,并有计划进行细胞检测、保存和制造。细胞库的水平可为根据细胞自身特点、生产状况和临床应用综合考虑建立细胞库检验标准,检验应满足安全性、质量可控性和/或有效性的基本要求。

  MSCs 产品中辅料的使用、剂量和质量应该经过开发和验证,以证明其使用的必要性、安全性和合理性,并建议优先选择已批准可用于人类药品的辅料,否则,辅料的选用需要进行全面的研究和评估,另外,一个更好的选择是在产品 IND 申请审评过程中对关键辅料进行关联审评审批。

  为了避免因储存而导致产品质量发生意外变化,生产商应在 MSCs 产品生产过程中对用于样品储存和/或成品的包装容器和封闭系统进行安全评估和相容性研究。为了说明其包装容器和封闭系统使用的合理性,还应进行其密封性研究和冷冻储存适用性研究。MSCs 产品的生产过程 (如采集的组织或细胞、制备过程中的细胞、成品的输注等) 可能涉及样品与容器之间短期直接接触的步骤,生产商同样应在接触式容器系统和 MSCs 产品之间进行安全评估和相容性研究。此外,建议在 IND 审评过程中对直接接触药品的容器和封闭系统进行关联审评审批。

  由于细胞具有在体内存活、自发增殖或/和分化的能力,其临床研究和质量控制应充分考虑上述基本特征,而 MSCs 产品应符合药品质量管理的一般要求。临床样品的整个制造过程合理,符合《药品生产质量管理规范(GMP)》的基本原则和相关要求,在生产过程和质量控制中应特别注意人员、环境、设备等要求。MSCs 产品的制造应建立全过程或全生命周期质量保证和控制体系,生产过程应进行严格的工艺验证,并建立明确的关键控制点。应严格控制生产用材料,并建立和验证 MSCs 产品生产现场的标准操作流程,以避免生产过程中原材料和生产可能受到外部污染或交叉污染。还应采取有效的隔离措施,防止混淆来自不同供者或不同预期用途的产品。

  MSCs 产品的生产过程,是指从供者材料获得细胞到完成细胞输入到受者体内的体外操作过程。生产商必须进行工艺开发和验证,以证明工艺的可行性和可靠性。生产过程中的每一个步骤都需要加以控制,以确保成品符合包括规格在内的所有质量属性。

  工艺验证,被定义为从工艺设计阶段到商业化生产的数据收集和评估,它建立工艺能够持续交付高质量的产品的科学证据。工艺验证包括 MSCs 产品和工艺生命周期内发生的一系列活动。工艺设计应避免细胞发生非预期或异常变化,并满足消除相关杂质的要求。建立技术标准、工艺标准操作规程、关键工艺控制参数、内控指标和废弃物标准,并对整个生产过程进行监控是十分必要的。生产商应继续优化生产工艺,减少物理、化学或生物效应对细胞特性的非预想效果,并减少杂质 (如蛋白酶、核酸酶和选择性抑制剂的使用) 。如果制造过程中存在不连续生产,则应制定并验证细胞的储存条件和持续时间。建议采用封闭或半封闭制备工艺,以降低污染和交叉污染的风险。

  整个生产过程的监控,包括关键工艺参数(CPP)监测和过程控制指标实现。生产商应根据对整个过程的了解和产品积累经验的基础上,明确过程控制中的关键生产步骤,制定敏感参数的限定范围,以避免过程漂移。必要时,还可以对生产过程中的细胞进行质量控制。生产过程中的质量控制和细胞放行检测相互结合和互补,以实现对整个过程和产品质量的控制。由于供体材料的多样性,可能含有传染病病原体,且过程可能造成污染。在 MSCs 产品的整个制造过程中,应特别注意防止微生物污染。

  MSCs 产品的剂型、处方和处方工艺应根据临床用药要求和 MSCs 产品的稳定性来确定。某些 MSCs 产品在给药前,需要经历产品成分物理状态的转变、容器的转换、过滤和清洗、与其它组织材料的结合以及药物剂量的调整等步骤。因此,还应开发和验证这些工艺步骤,并在实际产品生产和应用中严格执行。应提供有关 MSCs 生产所用组份和材料的制造信息,以及对这些材料进行的检测汇,应提供制造过程中使用的所有组份的清单。对于异基因细胞,有关供体筛选和检测的信息应表明所有供体均符合供体标准,MSCs 组织来源和分离、大规模扩增和收集培养必须要详细说明。细胞库部分应提供有关历史、来源、衍生和特性的信息 (包括确定细胞安全性、特性、纯度和稳定性的检测) 。

  IND 申请时,细胞生产过程中使用的所有试剂信息必须列明(包括基础培养基、细胞因子、生长因子、抗生素、胎牛血清、缓冲液和蛋白酶等) 。这些试剂可能会对最终产品的安全性、效力和纯度产生影响,并且通常是外源性的。因此,应控制和证明其来源、质量、鉴定以及从最终产品中去除。生产商的质检报告 (COA) 、质量标准和申请人的COA必须是材料管理的最重要信息之一。最终产品中存在的辅料也应同样列出,应详细说明生产程序,并提供细胞产品的分离、传代、纯化、规模化扩增、收集,产品的制备和分装和最终产品检测的流程图,此外,应详细说明细胞的制备、工艺时间和中间品储存以及最终配方。

  MSCs 产品的质量研究应在整个开发和规模化生产过程,从代表性产品批次和适当生产阶段样品中选择的样品上进行。质量研究应涵盖各种细胞分析,包括功能、纯度和安全性,可根据产品特性和属性添加其他相关研究项目。生产商必须为 MSCs 产品制定质量标准和质量控制策略,MSCs 产品应符合 NMPA 批准的药品质量标准,即药品注册标准。药品注册标准应当符合现行《中国药典》的一般技术要求,不得低于现行《中国药典》的规定。如果申报的注册品种所涉及的检测项目和指标不适用于现行《中国药典》,生产商应提供充分合理的支持数据,建议采用中间样品质量检验和最终产品放行试验相结合的机制。

  MSCs 产品的分析程序和方法必须经过系统地验证和确认,申请人应提交分析程序和方法验证和确认的数据,以支持 MSCs 细胞库和 MSCs 产品的鉴别、活力、质量、纯度和效力的文件。为了达到预期目的,分析程序和方法的典型验证特性应考虑下列因素:准确度、精度 (包括重复性和中间精密度) 、特异性、耐用性、检出限、定量限、线性和范围。分析报告,应包括原理、设备、操作参数、试剂、参考标准和材料、验收标准、样品制备、稳定性、标准制备、试验程序、系统适用性、计算、数据分析和结论。如果在 MSCs 产品的生命周期内,原材料、生产工艺、法定分析程序、国家标准和自行开发的分析程序发生任何关键变化,强烈建议开展再验证。此外,当生产商提议用替代分析程序替代经验证的分析程序时,或当分析程序从一个实验室转移到另一个实验室时,要求采用具有可比性的分析方法。目前,分析方法验证的主要挑战是中国乃至世界范围内标准品和参考品的严重短缺,因此,为了解决标准品和参考品严重短缺的问题,MSCs 产品生产商与标准品和参考品开发机构之间的密切合作是非常必要和紧迫的。

  随着研究的进展应逐步积累与过程相关的信息,并改进分析程序,以满足每个阶段的质量控制要求。质量控制一般应考虑鉴别试验 (细胞形态、表型、细胞标记等) 、生物功效、纯度、杂质、细胞数 (活细胞数、功能细胞数等) 、细胞生长活性、细胞周期、细胞倍增时间、克隆形成率和一般检测 (如无菌检测、支原体、内毒素、端粒酶的表达和活性等) 。应以细胞类型为基础进行细胞特性研究 (包括细胞形态、细胞表面标志物、基因表达、细胞分化、表面标志物表达、效价测试、分泌组的定性和定量测量,以及过程中添加成分的残留量检测) 。

  应基于细胞的性质、特征和预期用途,建立 MSCs 产品功能研究的分析程序。为建立合理有效的生物功效分析程序,作用机制应与临床适应症一致,就细胞纯度而言,建议检测细胞亚群和活力。杂质研究应包括细胞加工 (如蛋白酶、动物血清蛋白、重组蛋白和细胞因子等) 以及最终细胞产物 (如死细胞残留 物和其他可能的生物降解产物等) 。应根据细胞来源和工艺的特点考虑安全相关研究,并可针对外源病毒因子、细胞恶性转化的可能性、遗传稳定性、成瘤性和致瘤性等进行考虑。

  有关细胞给药过程的模拟研究应该进一步开发和完善。如果在医院的研究中心进行 (细胞恢复、产品稀释等) ,申请人应建立标准操作程序,并对临床研究人员进行良好的培训。强烈建议在完成给药操作前完成标准化工艺验证试验以验证最终产品质量 (如细胞形态、细胞表型、多系分化效力、细胞数量和存活率、外观、效力、特性、无菌性、支原体、内毒素,其他外源性物质等) 。效力评估,用于证明临床研究的所有阶段和市场批准后使用符合预定的规范或接受标准的产品批次。一般来说,对于细胞和基因治疗产品,没有单一的检测方法可以充分评估预测临床疗效的产品属性,因此,开发多个属性检测来评估细胞和基因治疗产品的效力是必要和可取的。

  每一批产品都应该进行放行检验,最终产品的质量标准应在 IND 中明确设置,通常采用表格格式,最终放行检验数据最好是在 MSCs 产品临床使用之前提供。所有产品从细胞收集到临床给药必须是可追踪和可识别的,并贴上适当的标签。

  推荐 MSCs 产品的生产采用连续工艺。对于生产过程中需要临时储存的样品,应进行储存稳定性研究,以支持其储存条件和储存期限。为了证明最终细胞产品在研究所需时间 (从最终放行到给药) 足够稳定稳定性试验是必须要进行的,并应注明最终产品的有效期。MSCs 产品稳定性研究的基本原则,可以根据产品自身特点、临床用药需求以及存储、包装和运输的运输条件,制定合理的研究计划。研究应使用具有代表性的细胞样本和存储条件进行。此外,还应开发和优化最终产品运输方案,并对方案稳定性进行验证。此外,还应验证给药前的产品准备程序以确认最终产品质量合格。

  IND 申请中的药学部分必须支持拟定的临床试验;非临床计划的目标应是确定拟定治疗产品的生物学合理性,并确定生物活性剂量水平。

  药效学研究,应采用可靠的方法来验证 MSCs 的治疗机制,并确定生物效应标志物。试验设计应考虑 MSCs 产品的作用机制、疾病周期、给药流程、以及细胞在体内的特性和存活时间等因素。建议使用相关的体外和体内模型完成 MSCs 产品的药效学研究。

  药代动力学研究,应能阐明细胞的体内过程和伴随的生物学行为。应根据 MSCs 的产品类型和特点选择合适的动物模型。通常雄性和雌性模型均应被考虑。根据研究目的和指标的临床价值,建立合适的生物学分析程序,并进行必要的分析验证。药代动力学研究应侧重于靶细胞的增殖、体内生物活性分子的表达和/或分泌,以及与宿主组织的相互作用。

  通常,药代动力学研究主要包括:细胞的分布、迁移和归巢、细胞分化、凋亡和衰老等等。

  MSCs 产品的毒理学研究和评估应符合“药物非临床试验良好实验室规范” (GLP) 。此 外,在非 GLP 条件下,应解释和评估非 GLP 对试验结果可靠性和完整性以及 MSCs 产品总体安全性评估的影响。

  MSCs 分泌的活性物质可能对我们身体的多个系统产生影响,包括中枢神经系统、心血管系统、呼吸系统等。MSCs 产品也可能影响重要器官功能,安全药理学试验可识别 MSCs 产品可能产生的人体安全的相关性不良药效学特性。因此,MSCs 产品应考虑开展安全药理学试验。此外,如果在毒性试验中发现潜在风险,则应补充相关的安全药理学试验以进行进一步评估。

  单次给药毒性试验,可以获得剂量与全身/局部毒性之间的剂量-反应关系,有助于了解毒性的靶器官,也可以为重复给药毒性试验的剂量设计提供一定的参考。单次给药时间应考虑细胞的存活时间,一般应比单次给药毒性试验的常规观察时间长。 目前,对于 MSCs 产品,单次给药毒性试验的观察期为1个月。

  试验设计,应包括常规毒理学研究的基本要素,并结合 MSCs 产品的特殊性,以获得尽可能多的安全性信息。根据 MSCs 产物的不同特性,应选择可产生 MSCs 产品生物活性的动物种类用于重复剂量毒性试验。如果可以在没有相关物种的情况下进行非临床研究,则非相关物种的动物实验也可能对评估生产工艺、全处方的安全性和非靶向效应具有一定的价值。参考《重复给药毒性试验技术指南》需要设计多个剂量水平,包括建议的临床剂量范围和最大可行剂量,以及处方组成和生产工艺。

  除常规指标外,还应根据产品特性选择适当的观察指标,如行为测试、神经功能检测、心脏功能评估、异位增生性病变 (如肿瘤) ,生物标记物,活性分子分泌,抗 MSCs 抗体水平,免疫反应,以及与宿主组织的相互作用。 对于重复给药毒性试验时间,ICH 指南建议啮齿动物模型为 6 个月,非啮齿动物模型为 9 个月。

  MSCs 产品的潜在免疫原性有待研究。关于免疫原性研究,请参考最新版本的技术研究指南,此外,应注意 MSCs 产品诱导的免疫毒性。

  MSCs 产品的致瘤性/致癌风险取决于细胞的分化状态、生长动力学变化(生产过程中使用的细胞培养工艺引起的) 、肿瘤形成的可能性(诱导或增强在宿主和目标患者中) 等,需要根据上述特点综合考虑。

  目前,关于如何选择动物模型进行致瘤性/致癌性研究,尚无科学共识。致瘤性/致癌性研究应使用临床拟用产品进行检验。致瘤性/致癌性研究需要确保细胞能够在体内长期存活,以研究是否存在潜在的肿瘤形成。在实验设计中应认真考虑以下几个方面:

  a)适当的对照组(如阳性对照、空白对照),建议有三种不同剂量的MSCs细胞组;

  b)每组必须有足够的动物使肿瘤发生率分析符合统计学要求,建议每组20只;

  e)建议试验周期足够长,一般为6个月。此外,由于免疫排斥,可以考虑使用免疫缺陷啮齿动物模型对人源性产品进行致瘤性/致癌性研究NOD/SCID、NPG、NSG、NOG等。

  对 MSCs 产品的生殖和发育毒性评估主要取决于 MSCs 产品的特性、临床适应症和临床使用人群,并应根据具体情况进行详细分析。

  对于人源 MSCs 产品,如果产品与 DNA 或其他遗传物质直接相互作用,则需要进行遗传毒性试验。

  根据 MSCs 产品的特点和临床应用,还应考虑评价局部耐受性、组织相容性和对分泌物质的耐受性。

  当 MSCs 产品进入临床试验阶段时,研究人员应遵循“《药物临床试验良好临床实践”(GCP)》、《人源干细胞及其衍生细胞治疗产品临床试验技术指南(征求意见稿)》 (CDE生物制品临床部于2020年7月发布) 、《ICH良好临床实践指南(E6-R1)》等要求。

  原则上,临床试验的内容应包括临床安全性评价、药代动力学、药效学、剂量摸索和验证性临床试验。此外,具体的临床研究设计可根据不同 MSCs 产品的性质参考选定的产品生物学指标进行调整。

  MSCs 的特性是选择指标的主要考虑因素。此外,研究人员通常根据体外和动物模型药效学选择合适的指标。此外,在临床试验机构注册,论文中报告的指标经某些中心批准药物评价的结果,也推荐作为新指标选择的参考。

  受试者选择,旨在确保对受试者的预期风险和潜在利益进行充分的评估,同时实现研究的科学目的。对于具有高风险特征的 MSCs 产品 (如长期或永久影响和侵入性给药) ,应该选择有望从治疗中获益的患者。受试者选择可能会影响临床试验的风险和获益,这些应在临床试验方案和知情同意书中充分说明。

  在早期临床试验中,主要目的通常是评估产品的安全性,次要目的是初步评估产品的疗效,即药效学评估。评估指标是指可能显示潜在有效性的短期影响或长期结果。在 MSCs 产品的活性评价中,可以包括特殊的指标 (如基因表达、细胞植入、形态学变化等生物标志物) 。还包括免疫功能的变化,或各种类型的生理反应。

  如果使用 MSCs 产品的目的是纠正功能缺陷或受损细胞的生物功能,那么也应该 MSCs 产品的生物学功能,如果 MSCs 产品的预期用途是修复、免疫、替换细胞、组织,并预期终身发挥功能,则应将相关结构、组织学测试指标作为潜在药效学标记物进行测试,包括显微镜检查、组织学检测、成像技术或酶活性指数检测等。

  应尽可能开展 MSCs 产品的体内过程研究,在临床试验中,应讨论研究要求、可能的方法和可行性,并应注意检测 MSCs 产品在细胞活力、增殖和分化能力、体内分布、迁移和相关生物活性药物动力学研究。如果需要多次给药 MSCs 产品,在设计临床方案时应考虑 MSCs 产品在体内的预期存活时间和相应功能。然而,由于缺乏方法上的限制,药物动力学的实施实际上是相当困难的。

  早期临床试验的目的之一是探索 MSCs 产品的有效剂量范围,如果可能还应确定最大耐受剂量。MSCs 产品的剂量,应根据产品质量控制研究和非临床研究中获得的结果确定,并应综合考虑该产品的生物学功效。

  一些 MSCs 产品将在受试者体内长期存在。因此,首次人体试验应采用单剂量方案。在充分了解产品毒性和作用时间后,可进行重复剂量临床试验。剂量增加的设定,应考虑到临床前数据和任何现有临床数据中与剂量变化相关的风险和活动。同时,应充分考虑 MSCs 产品的特定安全风险,并应设置足够的给药间隔和随访时间,以观察急性和亚急性不良事件。虽然 MSCs 产品的剂量可能取决于患者的个体情况,但早期临床试验提供的剂量探索研究的证据仍然是在验证性临床试验中确定剂量的重要基础。

  验证性临床试验,应在目标适应症人群中进行,应有足够的样本量,合理的控制,选择要达到的具有临床意义的研究终点,以及用于解决这些研究指标的详细统计方法,并且必须确定终点指标的测量方法。统计人员应计算适当的样本量,以回答有效统计效能的问题,

  此外,临床试验应能够提供临床给药方案,以产生预期的治疗效果、疗效持续时间以及目标人群的获益和风险。先前验证或公认的指标可作为替代终点,其应具有临床意义并与治疗效果相关。如果 MSCs 产品的疗效,取决于输入细胞生物活性的长期维持,则临床试验观察时间应为根据 MSCs 产品的预期生物活性设计,并应制定长期患者随访计划。

  安全性监测,应贯穿于MSCs 产品开发全过程。所有非临床研究中出现的安全性问题都应进行分析并提出解决方案,特别是在缺乏相应的动物模型或缺乏相应的动物模型来预测人与动物在生理差异背景下的安全性的情况下。

  在早期试验中,其主要目的是评估安全性,基于风险考虑,其他受试者应在第一个受试者的安全性完全暴露和评估后逐案纳入。安全性评价的一般监测,通常包括症状记录和临床常规检查。具体的监测项目取决于多种因素 (如 MSCs 产品的性质及其作用机制、研究人群、动物研究结果和任何相关临床试验经验包括发表的论文) 。 除了一般检查和监测预期和意外的安全问题,也有必要评估 MSCs 产品的特定预期安全性问题 (如急性或延迟输注反应、细胞因子释放综合征、自身免疫反应、移植物衰竭或MSCs产品失活、移植物与宿主反应、相关恶性疾病、供者传染病的传播等) 。 此外,申请人必须收集临床试验中的所有不良事件,并按照ICH E2A:临床安全数据管理:快速报告的定义和标准的要求向CDE报告和ICH E2B(R3):个案安全报告(ICSR)E2B(R3)数据元素和信息规范的电子传输实施指南。

  在 MSCs 产品的验证性临床试验和上市后阶段,除了一般症状记录和常规临床检查外,还应注意一些重要生物学过程的变化 (免疫反应、免疫原性、感染、恶性转化等) 。由于 MSCs 产品的药理活性可能缓慢或延迟,无论受试者是否接受了整个治疗计划,都应持续监测其安全性和药理活性。对于预期具有长期活性的产品,应随访患者以确定其长期疗效,并充分暴露与 MSCs 产品相关的安全问题。随访的持续时间,应能够提供 MSCs 产品活动有效性和持续时间的初步证据,并应考虑产品是否导致延迟的因素发病安全问题。

  基于风险管理,建议对重复给药产品进行临床安全性研究,在确定最大安全剂量时,应考虑重复剂量的可能性,在 MSCs 产品的临床试验中,不良反应的频率或严重程度存在很大的不确定性。因此,临床试验计划应包括停止标准、风险评估计划和一个独立的数据和安全监测委员会。

  NMPA 建议 MSCs 产品的临床试验计划应包括停药规则,以便随时控制风险和受试者数量。停药规则,通常规定事件的严重程度或频率 (如与适应症或给药方式有关的特定医疗事件或死亡) 。根据评估结果,临床试验方案可能会进行修订,以降低受试者的安全风险。修订一般包括入组标准的修订 (例如,排除有特定不良事件风险较高的受试者) ,或减少剂量和时间,调整产品配方或给药方式,或改进受试者安全监测方案。调整和改进试验计划后,可恢复试验。

  在制定风险管理计划时,应详细说明常规药物警戒和产品可追溯性。此外,应综合考虑在给药、个体化产品制备、特殊治疗或辅助治疗方面的可能差异,可能导致 MSCs 产品的疗效和安全性差异。作为风险管理的一部分,应制定标准化和可行的标准操作程序 (SOP) ,临床研究人员应接受系统培训并通过评估。

  MSCs 产品可能需要特定的长期研究来监测特定的安全性问题,包括失败。应评估长期安全性问题 (如感染、免疫原性、免疫抑制和恶性转化) 。需要足够的随访时间,来评估 MSCs 产品的安全性。作为高风险 MSCs 产品,患者早期随访时间应足够长,甚至终生随访,也可以根据 MSCs 生产经验的增加,在临床后期可延长或缩短随访间隔时间。

  对于包括 MSCs 产品在内的任何创新药物,强烈建议与 CDE 召开 IND 前沟通交流议会议。IND 前沟通交流会议为 II 类会议,在提交首次临床试验申请之前解决重大技术问题。

  技术问题主要包括:现有研究数据是否支持拟定的临床试验,以及临床试验受试者的风险是否可控等。会议请求应提交足够的信息 (包括临床试验提案、药物和非临床研究信息) 。申请人应准备并提交合格的“沟通会议申请表”和“沟通会议材料”。通过CDE官网上的“申请人窗口”提交沟通交流申请,申请时应注明沟通形式,沟通形式包括:面对面会议、视频会议、电话会议或书面回复。鼓励申请人通过电话会议与CDE沟通。笔者认为,面对面的沟通交流是对创新药物最有效的选择。

  CDE将决定沟通申请是否符合要求以及申请人提交的沟通形式。CDE通常会在收到沟通会议申请后60 天内批准召开PRE-IND 会议。当问题集中且具体时,会议通常最有成效可能的问题,应包括药品研究的前言和背景,并简要说明沟通交流问题的背景和目的,应尽可能避免提出新问题。通常 PRE-IND 会议安排为60min,偶尔可增加至90min。

  会议纪要,应按照“沟通和交流会议纪要模板”的要求编写。如果申请人和 CDE 达成协议,应该陈述他们的共同观点。如果没有达成协议,应该陈述各自的观点。但是笔者建议,申请人制定进一步的计划和建议,以便尽快对不同意见作出回应可接,受并获得CDE的批准的会议纪要。会议纪要,应在会议结束后30天内定稿,当然现场形成会议纪要最好。会议纪要将在定稿后 2 天内由 CDE 项目管理人员上传至通信系统,申请人可通过申请人窗口进行查看,会议记录主要包括两部分:共识和分歧,申请人要作为重要文件存档。

  PRE-IND 会议召开后,申请人拿到达成一致意见后签署的会议纪要后就可以进行IND申请的提交。当然,申请人必须充分解决在 PRE-IND 会议上提出的任何问题才能成功取得达成一致会议纪要。

  自2018年2月起,细胞治疗产品应按照人用药品注册规范共同技术文件组织指导文件进行资料准备。收到 IND 申请后,CDE有 5 天时间检查提交材料的完整性,根据生物制品注册验收和评审指南 (II类治疗性生物制品,征求意见稿) 决定是否接受 IND 申请。CDE 在接受申请后,将会给申请人一个受理号,并向申请人发出受理通知,IND 受理后,CDE 将进行专业审评和审批。

  在受理 IND 申请后,CDE将组织药学、药理学毒理学、医学和其他技术人员对IND 申请材料进行审查和评估。评审员可能有疑问,提供非保留意见,或在60 天内将 IND 置于暂停临床试验状态。通常,CDE 会提出意见和/或问题,并在60天 截止日期前联系申请人。此时,申请人及时对CDE专家进行回复,将有助于在 60 天时间范围内完成申请的审评。通常申请人应该在5个工作日内全面回答这些问题。

  在发现的问题得到全面解决之前,CDE 可以申请临床暂停以停止临床研究。IND中的几个关键部分是临床方案,包括合适的受试者选择、纳入和排除标准、研究终点、随访周期,停止规则和给药理由 (开始剂量/剂量递增) 、给药频率和时间表、工艺和质量研究以及安全性、药理学和毒理学研究。对于处于暂停临床试验状态的 IND 申请,申请人完成补充研究后,可重新提交注册 IND 申请材料,提交恢复临床试验申请。

  临床试验,MSCs 产品开发的最后一步,也是最重要的一步。MSCs 产品治疗的安全性和有效性,必须在临床试验中得到验证和确认。当 IND 启动时,研究人员和临床医生可以根据 CDE 批准的试验方案进行临床试验。申请人应在进行后续临床试验前制定相应的临床试验计划,经伦理委员会审核批准后实施,并提交相应的临床试验计划和支持信息。申请人应定期在 CDE 网站上提交试验期间的安全更新报告。临床试验期间的安全更新报告应每年提交一次,并在批准后每一年的 2 个月内提交。对于临床试验期间可疑的、意外的严重不良反应以及其他潜在的严重安全风险信息,申请人应按照相关要求及时向 CDE 报告。

  MSCs 从研发阶段到医院的临床应用,需要取得监管部门的批准后方可进行。熟悉监管事项的办理流程,有助于建立 IND 申请中所需资料准备和提交的清晰框架。在中国,建议尽早与 CDE 沟通。

  在法规监管下,做一个安全有效且质量稳定的 MSCs 产品很具有挑战性,毕竟MSCs 产品是拥有活细胞的固有特征的用于疾病治疗的产品。 因此,在临床试验中进行的 MSCs 的异质群体可能导致不同的结果,MSCs 产品生产工艺的优化和生物学效力分析方法的开发和验证可能需要很长时间。 此外,生物异质性、原材料标准、特性、试剂、无菌处理和低温保存都是开发过程中检查的必要条件。

  相关药物作用机制 (MOA) 的识别,对于确定异质性的可接受性至关重要。因为在特定临床应用中 MSCs 活性应有助于选择理想的 MSCs 群体,无论是一个异质群体还是一个特殊的亚群。目前开发的大多数 MSCs 候选产品,是在各种方案下扩增的异质性细胞群。 因此,MSCs 产品可通过体外 (细胞和生化) 和体内 (动物和临床) 研究各种特征。MSCs 产品需要确保符合标签要求,并符合适用的生物制剂和cGMP法规,CDE 要求提交临床研究所有阶段使用的产品数据,以确保质量、特性、纯度、强度和稳定性。

  因为与治疗剂量和产品疗效相关,生物学效力检测方法的开发非常重要,生物学效力检测 MSCs 产品的生物活性,并验证不同批次产品或不同 MSCs 产品之间的可比性。生物学效力检测数据,需要证明与拟议临床应用的生物学相关性。如果没有生物学效力检测方法,则可以考虑进行替代试验 (例如转录组和分泌组分析) 。FDA 已经发布过指导文件,其中建议开发细胞和基因治疗产品的效力分析。

  在提交 IND 申请之前,有许多关键的转化步骤需要完成 (包括工艺开发和改进、分析方法开发和验证、GMP合规车间建立和验证、质量风险评估和管理、药品质量体系建设和实施等等) 。所有这些开发步骤相互关联,对于 MSCs 产品过渡到临床试验非常关键,因此,MSCs 产品的开发和 IND 申请必然是一个漫长而复杂的过程。

  一般而言,MSCs 产品的 IND 申请流程包括产品制备、质量测试、质量管理等的合规流程。MSCs 产品开发的科学方面主要通过药物发现阶段的基础研究来解决,而合规性 MSCs 产品开发主要涉及国家和 NMPA 关于产品开发过程的参考法规和指南。从MSCs 治疗公司的角度来看,早期制定监管策略是可取的,在整个 MSCs 产品开发过程中,与监管机构密切沟通和合作也将使监管途径变得简单直接。

  单位介绍:天津昂赛细胞基因工程有限公司是国家发改委批准组建的细胞产品国家工程研究中心项目的法人单位。公司创始人韩忠朝教授是法国国家医学科学院和法国国家技术科学院两院院士,引领了我国干细胞产业化发展方向,其团队专注于干细胞药物研发,在国内研发的2款产品目前已经有5个适应症获得CDE默示许可。返回搜狐,查看更多

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